探究激光辅助孵化方法对胚胎解冻的影响

辅助孵化被用于辅助生殖相关技术已具有较长的时间，近几年随着显微激光相关医学的快速发展，激光系统由于具有快速、安全、准确等优点而被引入到辅助孵化，且已获得较好的临床效果。本文关于两种激光辅助孵化方法对人类早期胚胎解冻后移植妊娠率的影响进行研究分析，所研究的结果报道如下。MVE液氮罐

1资料和方法

1.1一般资料 将2013年11月到2014年7月期间在我院接受冻融胚胎移植的160例患者作为临床研究对象，按照随机的原则分为两组，每组80例，对照组中患者的年龄为27～40岁，平均年龄为(35.6±1.2)岁，该组患者子宫膜厚度平均值为(10.6±1.2)mm;研究组中患者的年龄为26～39岁，平均年龄为(35.3±1.0)岁，该组患者子宫膜厚度平均值为(10.7±1.6)mm。两组排除了宫腔因素引起的不孕患者，且年龄、子宫内膜厚度相似，差异无统计学意义(P>0.05)，可以进行对比分析。MVE液氮罐

1.2方法

1.2.1 D3胚胎评级 参照胚胎分级1级:胚胎卵裂球大小均匀，形态规则，透明带完整;胞质均匀清晰，没有颗粒现象，碎片0%～5%;2级:胚胎卵裂球大小略不均匀，形态略不规则，胞质可有颗粒现象，碎片10%～20%之间;3级:胚胎卵裂球明显大小不均，可有明显的形状不规则，胞质可有颗粒现象，胞质碎片21%～50%;4级:胚胎卵裂球大小严重不均，胞质可有严重颗粒现象，胞质碎片>50%。

1.2.2 冷冻胚胎 选择(1)正常受精;(2)D1、D2、D3连续发育;(3)D2在2细胞以上，D3卵裂球数≥6个;(4)胚胎评级2级以上;解冻后胚胎移植的标准:胚胎解冻后有超过50%的卵裂球存活的胚胎认为胚胎解冻后复苏，并用于移植。

1.2.3 胚胎慢速程序冷冻及解冻法 (1)胚胎冷冻:冷冻试剂盒Quinn’s胚胎冷冻配套培养基。操作步骤:胚胎于37℃移入Fl(冷冻稀释培养基(含10%SPS的HEPES液))中，将胚胎在培养皿的不同区域反复冲洗，放置10min;移入F2(1.5MPPD溶液)中，于室温平衡10min;移入F3(1.5MPPD+0.1M蔗糖溶液)中，装入冷冻麦管并封好管口。将冷冻管置入已在起始温度的程序冷冻仪中，开始冷冻从室温(25℃)开始，以2℃/min的速度从室温降至-8℃，当温度稳定在-8℃时，进行植冰，并停留10min，之后以-0.3℃/min的速度从-8℃降至-30℃，再以10℃/min的速度从-30℃降至-150℃，投入液氮，并转移至保存罐中。(2)胚胎解冻:解冻试剂盒Quinn’s胚胎解冻配套培养基。从液氮罐中取出麦管。在空气中保持30～40s。投入37℃水浴，30s，直到冰完全融化，然后将胚胎移入0.5M蔗糖解冻液中10min，再移至0.2M蔗糖解冻液中5min之后移入HEPES培养基(含10%SPS)中洗7次，最后移至预平衡的卵裂培养基中待行辅助孵化。MVE液氮罐

1.2.4 玻璃化冷冻和解冻法 试剂为瑞典Vitrolife卵裂期胚胎玻璃化冷冻/解冻配套培养基。按照试剂盒说明进行冷冻及复苏。(1)胚胎冷冻:所有的操作均在37℃热台上进行，把胚胎放入基础液(不含冷冻保护剂)里平衡5～10min，然后将胚胎移入以乙二醇作为冷冻保护剂的培养基中2min，最后在含有丙二醇、聚蔗糖和蔗糖为冷冻保护剂的冷冻液中平衡，30s内将胚胎移入低温冷冻载体(瑞典Vitrolife封闭式载体)上并转移入液氮中保存。(2)胚胎解冻:把冷冻载体从液氮中取出，然后迅速放入Warm1里10～30s后移入Warm2中1min后，再移入Warm3中平衡2min，最后将胚胎置入基础液中平衡5min，后移入预先平衡的卵裂培养基中等待行辅助孵化。

1.2.5 辅助孵化 显微激光操作系统。对照组进行激光透明带打孔辅助孵化，选取胚胎卵周隙的最大位置持续的以2～3ms的激光能量进行激光打孔将部分胚胎透明带切除掉，需保证中心部分完全的穿透透明带，尽量避免伤害到胚胎细胞，并将胚胎移到培养液滴中置于培养箱保存以等待进行移植;研究组进行激光透明带削薄辅助孵化，选取胚胎卵周隙的最大位置以4～6ms的激光能量将削薄1/4左右的胚胎透明带，削掉约50%～80%的透明带厚度，并防止穿透透明带，将胚胎移到培养液滴中置于培养箱保存等待进行移植。对对照组80例进行激光透明带打孔辅助孵化，对研究组80例进行激光透明带削薄辅助孵化，并且每组均有40例为程序冷冻、40例为玻璃化冷冻。将经激光辅助孵化后的卵裂期胚胎在腹部B超的指导下移植到患者的宫腔，并于移植后对患者使用黄体酮或者HCG进行黄体支持。

1.3统计学分析

使用统计学软件SPSS17.0对数据进行处理，计量资料使用(x-±s)表示，采用成组t检验，计数资料用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。MVE液氮罐