利用液氮罐储存细胞胚胎应注意哪些问题

细胞和胚胎是生物学实验中需要大量的超低温冷藏的样品，常规的方法有深冷冰箱储存法，但是压缩机不知什么时候会罢工，所以，采用MVE液氮罐的液氮超低温储存方法，就成了业内使用最为广泛的方法和技术。给您说说几个关于液氮罐保存细胞和胚胎的知识点。

     

　　一、在细胞培养过程中的使用

　 　细胞培养的一般过程，主要包括准备、取材、培养和冻存复苏4步。为保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用一 196℃液氮温度，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲基亚砜或甘油)的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮罐中。在极低的温度下，细 胞保存的时间几乎是无限的。

　　目前美国标准细胞库或细胞银行(ATCC)液氮冻存有3200个已经过鉴定的细胞系(1992)，其中包括来自正常人和各种疾病患者的皮肤成纤维细胞系和来自不同物种的近75个杂交瘤细胞株。

　　二、胚胎冷冻保存技术

　 　胚胎冷冻保存技术是指在低温条件下利用低温保护剂保存胚胎的一门技术。这一技术是20世纪后半叶随着人工授精技术广泛应用而产生的，目前已成为了现代生 命科学研究必备的手段之一。动物胚胎的冷冻保存原理就是因为低温降低了胚胎内的变质反应速度，温度越低，胚胎保存时间就越长。

　　目前已研究出多种胚胎冷冻保存方法，包括慢速冷冻法、快速冷冻法、一步冷冻法、直接移植冷冻法和玻璃化冷冻法等。其中玻璃化冷冻法的步骤如下：

　　①将胚胎在室温下放人25%玻璃化溶液(VS液)中预处理15min;

　　②将预处理后的胚胎放在高浓度(75%一90%)的VS液中保存20—40min;

　　③将经过两步抗冻剂处理的胚胎直接投入液氮中保存。

　　此外还可以用MVE液氮罐保存菌种、疫苗、骨组织、精子等物质，均可达到很好的长期存储的效果。

      常用胚胎和细胞保存液氮罐为广口翻盖型液氮罐，如YDS-110-290F型  YDS-100-200F型 里面配多层冻存管提篮，用来保存细胞等样品。大型液氮罐一罐可保存七八千只冻存管，对于细胞保存，也是一个超大的容器。