利用液氮罐进行畜牧业中牛的人工授精基本技术
时间:2019-07-08 09:40来源: 作者:ydgmve2020yyx 点击:
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人工授精是用器械采取公畜的精液，再用器械把精液输入到发情母畜生殖道内，以代替公母畜自然交配的一种配种方法。人工授精不仅有效地改变家畜的交配过程，更重要的是提高了公
人工授精是用器械采取公畜的精液，再用器械把精液输入到发情母畜生殖道内，以代替公母畜自然交配的一种配种方法。人工授精不仅有效地改变家畜的交配过程，更重要的是提高了公畜配种效能。人工授精只用于健康的公母畜，可防止各种疾病，已成为现代畜牧业的重要技术之一。
一、牛的发情鉴定
母牛的发情周期平均为21天，正常母牛发情周期的间隔时间变化很小，牛的发情期一般为1.5～3.5天。母牛发情时兴奋不安，吼叫，爬跨其他母牛，外阴部光滑肿胀、发红，阴道粘膜湿润，分泌出清亮的粘液，产奶量下降，食欲减退，嗅其它母牛尾根。母牛发情时其卵泡开始发育成熟最后排卵，是因为卵泡受到脑垂体前叶分泌的促卵泡激素和促黄体素的刺激而实现。一般根据牛的外部表现来判断母牛的发情，但为了确定排卵的具体时间，则必须作直肠检查，触摸卵巢、卵泡的发育情况。
二、最适输精时间
输精时间一般因母牛的年龄、品种、胎次、营养水平的不同而有所差异，一般母牛发情期中输精最佳时间是发情开始后12小时到发情终止或排卵前的12小时内。
三、器械和药物准备：
1、药业的配制75%酒精及75酒精棉球；1/3000新洁尔灭溶液；生理盐水棉球。
2、器械30L液氮贮存罐；牛用输精器；高压灭菌器。
3、器械的洗涤人工受精用的器械在每次使用以后，用洗涤剂洗刷干净，并需保持清洁、干净。
四、冷冻精液贮存
1、在液氮贮存馆内贮存的冷冻精液，必须切实地浸没于液氮中。
2、取放贮存冷冻精液的提筒只允许上提到液氮的管颈段之下，严禁提出罐外，在罐内脱离液氮的时间不得超过10s。
3、在向另一
MVE液氮罐
内转移冻精液时，精液提筒不得脱离液氮5s。
4、取放冷冻精液之后，应及时盖上罐塞，以减少液氮消耗及防止异物落入罐内。
5、严防不同品种、个体公畜的冷冻精液混杂，难以辨识。
6、对长期用作贮存冷冻精液的液氮罐应定期清理和洗刷。
五、解冻
解冻时把细管精液从液氮中取出，操作时间越短越好，时间过长，可影响其他未解冻精液的品质。解冻时把细管浸入40℃左右的温水中15秒左右，待管内精液的颜色发生变化后即可取出，在解冻时不要让精液升温过高。细管精液取出后，先用纱布擦净细管表面的水，握住手掌稍微揉一揉，最后将细管的封闭端剪掉，推进输精器里面，准备输精。
六、输精时间
选择最适宜的时间输精，才能保证生活力强的精子和卵子在受精部位相遇，提高受胎率。输精时间太早，精子丧失受精能力或死亡，不能使卵子受精;输精时间太迟，即使精子受精能力强，卵子排出时间太久，卵子衰老了也不能受精。母牛排卵后的受精能力为20～24小时，精子在母牛生殖道中受精能力为28～50小时，一般母牛发情初期输精受胎率低，发情后12小时或排卵前8小时输精最为合适。
输精方法
母牛需经发情鉴定及健康检查后才能给予输精。接受输精的母牛先要保定，牛一般站在输精架内输精，冲洗牛的外阴部并消毒，输精员的指甲要剪短磨光，洗涤擦干，并用75%酒精消毒。戴长臂手套采取直肠把握法输精时，先由左手掏出粪便，再伸入直肠，寻找并握住子宫颈，用胳膊压开阴门，右手持输精导管插入阴门，先向上倾斜避开尿道口，再转入水平直向子宫颈口，借助进入直肠内的一只手固定和协同动作，将精液输入子宫内或子宫颈5～6厘米处，最后轻轻地拉出输精器。输精母牛须做好记录，各项记录必须按时，准确，并定期进行统计分析
七、讨论和小结
为了提高受胎率，必须掌握影响受胎率的因素。决定受胎率的主要因素有：种公牛精液品质，母牛发情排卵机能，人工授精技术操作质量，输精时间等。
牛冷冻精液人工授精技术操作规程
1 范围
本标准规定了人工授精站具备的条件、输精器械的清洗消毒、冻精的运输保存、母牛的发情鉴定、母牛的输精操作、母牛的妊娠检查。
本标准适用于全省各养牛场、户母牛的冷冻精液人工授精技术操作。
2 人工授精站具备的条件
2.1 人工授精站应建在交通方便、能繁母牛相对集中的地方。人工授精站的建立应符合当地良种牛推广和改良规划。
2.2从事牛冷冻精液人工授精操作的人员须取得县级畜牧行政主管部门颁发的上岗证。
2.3人工授精站设置冻精贮存室和输精操作室。
2.3.1冻精贮存室安装空气消毒设备，室内保持清洁干燥，窗明台净。
2.3.2输精操作室设在向阳、干燥的地方，室内安装母牛保定架。
2.4 人工授精站应配备液氮生物容器、显微镜、卡苏枪、镊子、细管剪、温度计等器械。
3 输精器械的清洗消毒
3.1 各种器械用后先用肥皂水或2％的小苏打水洗刷除污， 再用温开水冲洗干净。
3.2 玻璃、金属器械、胶球(用纱布包好)和布类用蒸汽灭菌三十分钟或干热灭菌。金属和玻璃器械也可用75％的酒精擦拭和吸注消毒，并在酒精火焰上烘干。
3.3输精器用后及时清洗、消毒。每配种一头母牛，须使用一支消毒过的卡苏枪。塑料外套管只能使用一次。
4 冻精的运输保存
4.1冻精要贮存在装有足够液氮的生物贮存容器中，定期添加液氮。容器内的冻精不得暴露在液氮面外。
4.2在运输液氮、冻精时，应使用生物运输容器。用车辆运输时，除利用原保护套外，应另加木箱或其它保护装置加以固定。
4.3从容器内取冻精时，只能将提筒置于容器颈下部，用长柄镊夹取冻精。如10秒钟内尚未取放完毕，应将提筒放回液氮中浸泡一下再继续提取。
4.4、贮存的冻精需向另一容器转移时，冻精最好浸泡在液氮中进行。冻精在空气中暴露的时间不得超过5秒。
5 母牛的发情鉴定
5.1外部观察法：母牛表现出兴奋、站立不安、哞叫、食欲减退、频尿、外阴部湿润、肿胀、流透明粘液等征状，可判断为发情。
5.1.1 发情初期：母牛兴奋不安，追爬其他母牛，但拒绝爬跨；****肿胀，粘液透明，不呈牵丝状，粘性强。
5.1.2 发情盛情：母牛温顺，接受爬跨，****肿胀。粘液透明，量多，呈牵丝状，粘性强。
5.1.3发情末期：母牛拒绝爬跨，****肿胀消退，粘液半透明、粘稠，粘性差，牵丝较短。
5.2直肠检查法：发情母牛子宫颈稍大、较软，子宫角体积增大，子宫收缩反应明显。
5.2.1发情初期：卵泡直径0.5厘米左右，触诊时为一软化点。5.2.2发情盛期：卵泡增大到1～1.5厘米，呈圆形，明显突出于卵巢表面，波动明显。
5.2.3发情末期：卵泡不再增大，泡壁变薄，紧张度增加，有一触即破之感。
6 母牛的输精操作
6.1冻精的准备
6.1.1冻精应来自于取得农业部颁发的《种畜禽生产经营许可证》的冻精生产站。
6.1.2发情母牛的每次输精量为细管冻精一支，冻精解冻后的精子活力不低于0.3。
6.1.3用38土2℃温水直接浸泡30秒钟解冻细管冻精。将解冻的细管剪去顶部封口后插入卡输枪，套上塑料外套管备用。
6.2母牛的输精时间
6.2.1母牛的适宜输精时间在发情末期。
6.2.2发情母牛一个情期输精两次的，其间隔时间为8～12小时。
6.3输精母牛的准备
6.3.1将输精母牛固定在保定架内，用细绳拴好尾巴拉向一侧固定。
输精人员将手指甲剪短、磨光，戴上长臂手套。对输精母牛肛门及外阴进行消毒后擦干。? 6.3.2
6.4输精方法：输精人员将一只手伸入母牛直肠内，寻找并握住子宫颈的外口端，手臂往下按压使阴门裂开，另一只手把准备好的卡输枪自阴门向斜上方插入5～10厘米(避开尿道口)，再改为平插，把卡输枪送到子宫颈外口，然后两手互相配合，使卡输枪缓缓越过子宫颈管中的皱壁轮，将精液注入子宫颈内。
7 母牛的妊娠检查
7.1外部观察法
7.1.1母牛配种后二、三个情期仍未出现发情者，可初步认为妊娠。
7.1.2母牛妊娠三个月后，性情变得温顺，食欲增加，被毛出现光泽。妊娠五、六个月后，腹围增大，右侧腹壁突出，可在腹壁触到或看到胎动。
7.2直肠检查法
7.2.1母牛妊娠一个月，两侧子宫角不对称，角间沟清楚。孕角较空角稍大变粗、柔软，有液体波动感，弯曲度变小。孕侧卵巢较大，有黄体突出于表面。子宫中动脉如麦秆粗。
7.2.2母牛妊娠二个月，孕角比空角粗约两倍。角间沟平坦。孕角薄软，波动明显。孕侧卵巢较大，有黄体。孕侧子宫中动脉增粗一倍。
7.2.3母牛妊娠三个月，孕角大如耍儿头，波动感明显，空角比平时增粗一倍，子宫开始沉入腹腔，角间沟已摸不清楚。孕侧子宫中动脉增粗2至3倍，有时可摸到特异博动
。MVE液氮罐
牛塑料细管冷冻精液
人工授精技术操作规程
家畜冷冻精液人工授精是近代畜牧科学的一项新技术，新疆维吾尔自治区近几年的黄牛改良工作实践证明它可以不受时间、地点的限制，可扩大最优秀种公牛的配种利用效率，有力地加快家畜配种改良的进程，它比常规人工授精具有更高的操作要求和科学性，为加强广大基层操作人员的责任心，进一步提高细管冻精配种的技术水平，使细管冻精人工授精技术操作规范化，保证冷冻精液授精的受胎效果，特制定本操作规程。
1、 液氮罐人工授精人员
（1）人工授精人员必须具有家畜繁殖基础理论知识，熟练掌握细管冻精人工授精的各个主要技术环节。例如：细管冷冻精液的保存、运输、解冻，精液品质鉴定、贮氮、贮精容器的使用，母畜生殖器管的解剖生理，发情鉴定、直肠把握子宫颈输精及妊娠诊断等技术，必须了解、掌握，并熟练应用于实际中，掌握基本的消毒灭菌的方法，控制预防和治疗母畜生殖器官传染病及母畜产科疾病的知识。
（2）人工授精人员要刻苦钻研业务技术，经县以上主管部门考核合格，发给合格证书方能从事细管冻精人工授精业务，主管部门应按其技术高低分别授予不同的技术职称，对工作成绩低劣，责任心不强，长期不能完成冷配受胎任务者，应停止输精业务，进一步进行技术培训。人工授精员要相对稳定于一定区域或岗位，以利熟悉情况和巩固结果。
（3）人工授精站点及人工授精员设置应有规划，各地州县可根据自己的具体情况安排实施，原则上单罐年配种量应达250头以上，单罐输精配种头数愈多，愈有利于降低配种成本。
2、细管冷冻精液的剂型及质量标准
目前，新疆维吾尔自治区可供采用的牛冻精剂型主要由两种：即颗粒冻精、细管冻精，目前主要以细管冻精为主。
（1）颗粒冻精必须达到下列标准：剂量每颗粒0.1亳升±0.01；解冻活力不低于0.35（即35%前进运动精子）；解冻后精子畸形率20%，顶体完整率40%以上；卫生指标：无国标GB4143-84规定的各种传染性疫病；每毫升细菌菌落数不得高于1000个，解冻后的精液中无病源性微生物。
（2）塑料细管冻精：剂量主要以0.25ML为主，每剂有效精子数不低于1000万个，其它与颗粒冻精相同。
细管精液每个剂量上的标准应清晰，包装完整、准确、细管封口严密、无裂痕。
3、运输
（1）购买冻精运输人员一定要了解冻精的基本原理，挑选责任心强，工作细致，具有冻精检查能力者承担，运输前要检查容器的质量，看是否安全适用，并定时检查液氮的消耗情况，及时添加液氮，运输前后一定要保证细管冻精完全浸泡在液氮中，如发现液氮消耗过多或罐的外壳有水珠或挂霜，说明罐的保冷性能有问题，应及时更换。
（2）对液氮罐要细心爱护，搬运时要握住手柄，抬起罐体不得拖行、躺放、倒置、叠放，装好液氮的罐子，要及时罩上皮套、棉套或装入纸盒或木箱，严防撞击或翻倒。盛有精液的液氮罐严禁在阳光下直晒。
（3）冻精运输前后应办好交接手续，填写卡片、签名、精液要抽样检查，达不到质量标准应拒绝接受（签名），亦不得发放用于输精。
4、保存
（1）液氮罐要专人负责保存，使用和保养，放置在室内干燥、通风和安全处，罐下应垫以木板，离地面二十至三十厘米高，室内不准吸烟，不住人。
（2）为便于分发和使用冻精，罐口外面必须拴系有标签，标记品种名称、种公牛号，罐内冻精标记有冻精制作时间，解冻活力制作单位，细管（或颗粒）数量，品种代码及种公牛号等，新疆维吾尔自治区畜禽繁育改良总站生产的细管冻精印字标记，顺序为日、月、年—站名—品种代码—牛号，例如[05、11、2000、自治区改良站、XM、2415]或年、月、日—站名—品种代码—牛号。
（3） 取放细管冻精时，一定做到动作稳、准、快，在室温下，冻精由一个液氮容器转移到另一个液氮容器时，操作时间不得超过5秒钟。单个取用时不宜将整个精液袋提至液氮颈口上，暴露在空气中，精液取用或转移完毕后，立即加上盖塞。如果分取的精液数量较多，必须准备另一个盛有液氮的广口容器，在盛有液氮的容器中进行分装或计数。
（4）贮精罐要每隔5—7天检查称重一次，保管精液的人员要了解每个罐液氮消耗情况。一般我们要了解液氮罐的消耗情况可依据公式得出结果：总重量减去液氮罐重即得液氮重（公斤数），除以系数0.808即可得知罐内液氮公升数。当罐内液氮容量低于全容量的三分之一时，需及时补充添加液氮以防精液报废。
（5）冻精贮存器至少每年或每个配种期结束时要彻底清洗一次。清洗时将罐内存留的液氮全部倒净，取出残留在罐底的细管冻精（颗粒冻精弃之），经过两天左右待容器内的温度上升至室温，以40℃—50℃的温水或中性洗涤剂，用细软的纱布擦洗干净，并敞口凉干内部。有条件的地方可用40℃—50℃热空气吹干封闭，保存备用。
5、药械准备
（1）各改良点或人工授精配种网点，要备齐各种人工授精必用的器械和药品，细管冻精不需要解冻液，但需准备有检查活力的盖玻片与载片、保温箱、卡苏输精器、细管剪刀等常用设施。
（2）器械消毒准备，器械在使用前必须检查有无破损或失灵，输精器及配种所需的外套、细管剪刀等无菌保存所用的毛巾等用洗衣粉温水洗净，然后用清水洗干净，再用蒸溜水冲洗两遍，沥干水分。
（3）药液配制，配制各种药液和解冻液前，应先调整好天平，使药品称量准确，溶液中所用的蒸馏水体积要量度准确，颗粒冻精解冻常用的2.9%柠檬酸钠液一般现用现配，亦可制成安瓿，保存在0℃—5℃的冰箱中，随时取用。
6、细管冻精解冻
（1）首先将38℃—40℃的温水倒入敞口铝式饭盒中，调试好温度，并从液氮中迅速取出细管冻精投入水中快速摆动10—15秒钟，取出后用干净纱布擦去水珠，并放入手掌中快速搓动数下使细管中的精液混匀，为使精液在解冻后可以保存较长时间，以及为了防止输精时室温过低对已经升温的精液产生不良影响，在解冻时不要让精液升温过高。冷冻精液一般要求输精前几分钟，最多不超过15分钟前解冻，并立即使用。必要时也可体温化解，也可35℃水浴30秒解冻，装枪前必须借助手温快速搓动，使温度回升精液复苏再输精，此解冻方法配种技术熟练的人员可尝试，目前不积极提倡。
（2）解冻后的细管冻精用净卫生纸或消毒棉纱擦干，用细管专用剪刀平直横剪封口前端1.2—1.5CM后棉塞端装入输精枪准备输精。
（3）细管冻精也可采用35℃水温30秒钟解冻，此方法可延长精子存活时间，冷配技术熟练人员可尝试。
（4）细管冻精在解冻后应检查精子活力，标准镜检温度37℃—38℃，活力检查需在解冻后3—5分钟精子完全复苏时进行，解冻活力不足0.35不得用以输精，活力评定应取多视野，多液层平均值，解冻精液宜在解冻后立即使用，最多不超过15分钟。
（5）基层各配种站点一定要规范试验室操作方法，配齐简易检测设备，如：保温箱、载片、盖片、细管剪刀等，而且一定要强调检查活力的试验室室温不能低于15℃，保温箱温度不能低于37℃，从而抑制精子活力的复苏。同时，所有检查精子活力的器械设备一定要保持清洁干净，避免人为的因素造成检查精子活力偏低的种种问题出现。
7、输精
（1）母牛发情鉴定：“以直肠检查为主，结合观察询问、检查纪录等综合判断”为准绳的原则进行人工授精。输精适宜时间应在发情末期，即排卵前0—12小时，最好在排卵前6小时，排卵后立即追配一般效果稍差。
（2）输精方法应采用直肠把握子宫颈深部输精法。输精动作要柔和、快捷，做到“轻插、适深、缓注、慢出”。输精剂量必须准确，防止夹吸母牛努责（努责时可将母牛稽甲部捏抓几下）残留精液过多或严重努责时应补输一剂。冬季气温低寒时应防止精液受冷打击，输精枪应用消毒毛巾包裹为佳。
（3）输精人员必须有严格无菌操作观念，输精前结合直检卵泡发育，掏尽粪便。输精前应用千分之一的高锰酸钾水清洗母牛后躯，重点为肛门、会阴、尾根，擦干后用消毒生理盐水棉球擦净外阴部及阴门裂内部，不得有粪便污染。输精器必须在无污染的情况下直接插入阴道，随后再用另一只手插入直肠，把握子宫颈，每输精一次必须更换一支输精器外套。（严格讲外套只需使用一次，但根据我区实际，输精器外套可重复使用数次，但应严格消毒）
（4）输精后，应检查残留量及未滴的精子活力，如剂量不足，活力明显下降，应检查原因，并作补输。
8、记录统计及报表
（1）母牛繁殖记录表，每头母牛登记一张，配种时认真逐项填写，并长期保存，并将冷配产犊公、母性别登记准确，按时统计上报。
（2）评定细管冻精配种效果，主要以第一情期受胎率的高低为标准，一般我们也以平均情期受胎率为标准。MVE液氮罐
一、牛的发情鉴定
母牛的发情周期平均为21天，正常母牛发情周期的间隔时间变化很小，牛的发情期一般为1.5～3.5天。母牛发情时兴奋不安，吼叫，爬跨其他母牛，外阴部光滑肿胀、发红，阴道粘膜湿润，分泌出清亮的粘液，产奶量下降，食欲减退，嗅其它母牛尾根。母牛发情时其卵泡开始发育成熟最后排卵，是因为卵泡受到脑垂体前叶分泌的促卵泡激素和促黄体素的刺激而实现。一般根据牛的外部表现来判断母牛的发情，但为了确定排卵的具体时间，则必须作直肠检查，触摸卵巢、卵泡的发育情况。
二、最适输精时间
输精时间一般因母牛的年龄、品种、胎次、营养水平的不同而有所差异，一般母牛发情期中输精最佳时间是发情开始后12小时到发情终止或排卵前的12小时内。
三、器械和药物准备：
1、药业的配制75%酒精及75酒精棉球；1/3000新洁尔灭溶液；生理盐水棉球。
2、器械30L液氮贮存罐；牛用输精器；高压灭菌器。
3、器械的洗涤人工受精用的器械在每次使用以后，用洗涤剂洗刷干净，并需保持清洁、干净。
四、冷冻精液贮存
1、在液氮贮存馆内贮存的冷冻精液，必须切实地浸没于液氮中。
2、取放贮存冷冻精液的提筒只允许上提到液氮的管颈段之下，严禁提出罐外，在罐内脱离液氮的时间不得超过10s。
3、在向另一
MVE液氮罐
内转移冻精液时，精液提筒不得脱离液氮5s。
4、取放冷冻精液之后，应及时盖上罐塞，以减少液氮消耗及防止异物落入罐内。
5、严防不同品种、个体公畜的冷冻精液混杂，难以辨识。
6、对长期用作贮存冷冻精液的液氮罐应定期清理和洗刷。
五、解冻
解冻时把细管精液从液氮中取出，操作时间越短越好，时间过长，可影响其他未解冻精液的品质。解冻时把细管浸入40℃左右的温水中15秒左右，待管内精液的颜色发生变化后即可取出，在解冻时不要让精液升温过高。细管精液取出后，先用纱布擦净细管表面的水，握住手掌稍微揉一揉，最后将细管的封闭端剪掉，推进输精器里面，准备输精。
六、输精时间
选择最适宜的时间输精，才能保证生活力强的精子和卵子在受精部位相遇，提高受胎率。输精时间太早，精子丧失受精能力或死亡，不能使卵子受精;输精时间太迟，即使精子受精能力强，卵子排出时间太久，卵子衰老了也不能受精。母牛排卵后的受精能力为20～24小时，精子在母牛生殖道中受精能力为28～50小时，一般母牛发情初期输精受胎率低，发情后12小时或排卵前8小时输精最为合适。
输精方法
母牛需经发情鉴定及健康检查后才能给予输精。接受输精的母牛先要保定，牛一般站在输精架内输精，冲洗牛的外阴部并消毒，输精员的指甲要剪短磨光，洗涤擦干，并用75%酒精消毒。戴长臂手套采取直肠把握法输精时，先由左手掏出粪便，再伸入直肠，寻找并握住子宫颈，用胳膊压开阴门，右手持输精导管插入阴门，先向上倾斜避开尿道口，再转入水平直向子宫颈口，借助进入直肠内的一只手固定和协同动作，将精液输入子宫内或子宫颈5～6厘米处，最后轻轻地拉出输精器。输精母牛须做好记录，各项记录必须按时，准确，并定期进行统计分析
七、讨论和小结
为了提高受胎率，必须掌握影响受胎率的因素。决定受胎率的主要因素有：种公牛精液品质，母牛发情排卵机能，人工授精技术操作质量，输精时间等。
牛冷冻精液人工授精技术操作规程
1 范围
本标准规定了人工授精站具备的条件、输精器械的清洗消毒、冻精的运输保存、母牛的发情鉴定、母牛的输精操作、母牛的妊娠检查。
本标准适用于全省各养牛场、户母牛的冷冻精液人工授精技术操作。
2 人工授精站具备的条件
2.1 人工授精站应建在交通方便、能繁母牛相对集中的地方。人工授精站的建立应符合当地良种牛推广和改良规划。
2.2从事牛冷冻精液人工授精操作的人员须取得县级畜牧行政主管部门颁发的上岗证。
2.3人工授精站设置冻精贮存室和输精操作室。
2.3.1冻精贮存室安装空气消毒设备，室内保持清洁干燥，窗明台净。
2.3.2输精操作室设在向阳、干燥的地方，室内安装母牛保定架。
2.4 人工授精站应配备液氮生物容器、显微镜、卡苏枪、镊子、细管剪、温度计等器械。
3 输精器械的清洗消毒
3.1 各种器械用后先用肥皂水或2％的小苏打水洗刷除污， 再用温开水冲洗干净。
3.2 玻璃、金属器械、胶球(用纱布包好)和布类用蒸汽灭菌三十分钟或干热灭菌。金属和玻璃器械也可用75％的酒精擦拭和吸注消毒，并在酒精火焰上烘干。
3.3输精器用后及时清洗、消毒。每配种一头母牛，须使用一支消毒过的卡苏枪。塑料外套管只能使用一次。
4 冻精的运输保存
4.1冻精要贮存在装有足够液氮的生物贮存容器中，定期添加液氮。容器内的冻精不得暴露在液氮面外。
4.2在运输液氮、冻精时，应使用生物运输容器。用车辆运输时，除利用原保护套外，应另加木箱或其它保护装置加以固定。
4.3从容器内取冻精时，只能将提筒置于容器颈下部，用长柄镊夹取冻精。如10秒钟内尚未取放完毕，应将提筒放回液氮中浸泡一下再继续提取。
4.4、贮存的冻精需向另一容器转移时，冻精最好浸泡在液氮中进行。冻精在空气中暴露的时间不得超过5秒。
5 母牛的发情鉴定
5.1外部观察法：母牛表现出兴奋、站立不安、哞叫、食欲减退、频尿、外阴部湿润、肿胀、流透明粘液等征状，可判断为发情。
5.1.1 发情初期：母牛兴奋不安，追爬其他母牛，但拒绝爬跨；****肿胀，粘液透明，不呈牵丝状，粘性强。
5.1.2 发情盛情：母牛温顺，接受爬跨，****肿胀。粘液透明，量多，呈牵丝状，粘性强。
5.1.3发情末期：母牛拒绝爬跨，****肿胀消退，粘液半透明、粘稠，粘性差，牵丝较短。
5.2直肠检查法：发情母牛子宫颈稍大、较软，子宫角体积增大，子宫收缩反应明显。
5.2.1发情初期：卵泡直径0.5厘米左右，触诊时为一软化点。5.2.2发情盛期：卵泡增大到1～1.5厘米，呈圆形，明显突出于卵巢表面，波动明显。
5.2.3发情末期：卵泡不再增大，泡壁变薄，紧张度增加，有一触即破之感。
6 母牛的输精操作
6.1冻精的准备
6.1.1冻精应来自于取得农业部颁发的《种畜禽生产经营许可证》的冻精生产站。
6.1.2发情母牛的每次输精量为细管冻精一支，冻精解冻后的精子活力不低于0.3。
6.1.3用38土2℃温水直接浸泡30秒钟解冻细管冻精。将解冻的细管剪去顶部封口后插入卡输枪，套上塑料外套管备用。
6.2母牛的输精时间
6.2.1母牛的适宜输精时间在发情末期。
6.2.2发情母牛一个情期输精两次的，其间隔时间为8～12小时。
6.3输精母牛的准备
6.3.1将输精母牛固定在保定架内，用细绳拴好尾巴拉向一侧固定。
输精人员将手指甲剪短、磨光，戴上长臂手套。对输精母牛肛门及外阴进行消毒后擦干。? 6.3.2
6.4输精方法：输精人员将一只手伸入母牛直肠内，寻找并握住子宫颈的外口端，手臂往下按压使阴门裂开，另一只手把准备好的卡输枪自阴门向斜上方插入5～10厘米(避开尿道口)，再改为平插，把卡输枪送到子宫颈外口，然后两手互相配合，使卡输枪缓缓越过子宫颈管中的皱壁轮，将精液注入子宫颈内。
7 母牛的妊娠检查
7.1外部观察法
7.1.1母牛配种后二、三个情期仍未出现发情者，可初步认为妊娠。
7.1.2母牛妊娠三个月后，性情变得温顺，食欲增加，被毛出现光泽。妊娠五、六个月后，腹围增大，右侧腹壁突出，可在腹壁触到或看到胎动。
7.2直肠检查法
7.2.1母牛妊娠一个月，两侧子宫角不对称，角间沟清楚。孕角较空角稍大变粗、柔软，有液体波动感，弯曲度变小。孕侧卵巢较大，有黄体突出于表面。子宫中动脉如麦秆粗。
7.2.2母牛妊娠二个月，孕角比空角粗约两倍。角间沟平坦。孕角薄软，波动明显。孕侧卵巢较大，有黄体。孕侧子宫中动脉增粗一倍。
7.2.3母牛妊娠三个月，孕角大如耍儿头，波动感明显，空角比平时增粗一倍，子宫开始沉入腹腔，角间沟已摸不清楚。孕侧子宫中动脉增粗2至3倍，有时可摸到特异博动
。MVE液氮罐
牛塑料细管冷冻精液
人工授精技术操作规程
家畜冷冻精液人工授精是近代畜牧科学的一项新技术，新疆维吾尔自治区近几年的黄牛改良工作实践证明它可以不受时间、地点的限制，可扩大最优秀种公牛的配种利用效率，有力地加快家畜配种改良的进程，它比常规人工授精具有更高的操作要求和科学性，为加强广大基层操作人员的责任心，进一步提高细管冻精配种的技术水平，使细管冻精人工授精技术操作规范化，保证冷冻精液授精的受胎效果，特制定本操作规程。
1、 液氮罐人工授精人员
（1）人工授精人员必须具有家畜繁殖基础理论知识，熟练掌握细管冻精人工授精的各个主要技术环节。例如：细管冷冻精液的保存、运输、解冻，精液品质鉴定、贮氮、贮精容器的使用，母畜生殖器管的解剖生理，发情鉴定、直肠把握子宫颈输精及妊娠诊断等技术，必须了解、掌握，并熟练应用于实际中，掌握基本的消毒灭菌的方法，控制预防和治疗母畜生殖器官传染病及母畜产科疾病的知识。
（2）人工授精人员要刻苦钻研业务技术，经县以上主管部门考核合格，发给合格证书方能从事细管冻精人工授精业务，主管部门应按其技术高低分别授予不同的技术职称，对工作成绩低劣，责任心不强，长期不能完成冷配受胎任务者，应停止输精业务，进一步进行技术培训。人工授精员要相对稳定于一定区域或岗位，以利熟悉情况和巩固结果。
（3）人工授精站点及人工授精员设置应有规划，各地州县可根据自己的具体情况安排实施，原则上单罐年配种量应达250头以上，单罐输精配种头数愈多，愈有利于降低配种成本。
2、细管冷冻精液的剂型及质量标准
目前，新疆维吾尔自治区可供采用的牛冻精剂型主要由两种：即颗粒冻精、细管冻精，目前主要以细管冻精为主。
（1）颗粒冻精必须达到下列标准：剂量每颗粒0.1亳升±0.01；解冻活力不低于0.35（即35%前进运动精子）；解冻后精子畸形率20%，顶体完整率40%以上；卫生指标：无国标GB4143-84规定的各种传染性疫病；每毫升细菌菌落数不得高于1000个，解冻后的精液中无病源性微生物。
（2）塑料细管冻精：剂量主要以0.25ML为主，每剂有效精子数不低于1000万个，其它与颗粒冻精相同。
细管精液每个剂量上的标准应清晰，包装完整、准确、细管封口严密、无裂痕。
3、运输
（1）购买冻精运输人员一定要了解冻精的基本原理，挑选责任心强，工作细致，具有冻精检查能力者承担，运输前要检查容器的质量，看是否安全适用，并定时检查液氮的消耗情况，及时添加液氮，运输前后一定要保证细管冻精完全浸泡在液氮中，如发现液氮消耗过多或罐的外壳有水珠或挂霜，说明罐的保冷性能有问题，应及时更换。
（2）对液氮罐要细心爱护，搬运时要握住手柄，抬起罐体不得拖行、躺放、倒置、叠放，装好液氮的罐子，要及时罩上皮套、棉套或装入纸盒或木箱，严防撞击或翻倒。盛有精液的液氮罐严禁在阳光下直晒。
（3）冻精运输前后应办好交接手续，填写卡片、签名、精液要抽样检查，达不到质量标准应拒绝接受（签名），亦不得发放用于输精。
4、保存
（1）液氮罐要专人负责保存，使用和保养，放置在室内干燥、通风和安全处，罐下应垫以木板，离地面二十至三十厘米高，室内不准吸烟，不住人。
（2）为便于分发和使用冻精，罐口外面必须拴系有标签，标记品种名称、种公牛号，罐内冻精标记有冻精制作时间，解冻活力制作单位，细管（或颗粒）数量，品种代码及种公牛号等，新疆维吾尔自治区畜禽繁育改良总站生产的细管冻精印字标记，顺序为日、月、年—站名—品种代码—牛号，例如[05、11、2000、自治区改良站、XM、2415]或年、月、日—站名—品种代码—牛号。
（3） 取放细管冻精时，一定做到动作稳、准、快，在室温下，冻精由一个液氮容器转移到另一个液氮容器时，操作时间不得超过5秒钟。单个取用时不宜将整个精液袋提至液氮颈口上，暴露在空气中，精液取用或转移完毕后，立即加上盖塞。如果分取的精液数量较多，必须准备另一个盛有液氮的广口容器，在盛有液氮的容器中进行分装或计数。
（4）贮精罐要每隔5—7天检查称重一次，保管精液的人员要了解每个罐液氮消耗情况。一般我们要了解液氮罐的消耗情况可依据公式得出结果：总重量减去液氮罐重即得液氮重（公斤数），除以系数0.808即可得知罐内液氮公升数。当罐内液氮容量低于全容量的三分之一时，需及时补充添加液氮以防精液报废。
（5）冻精贮存器至少每年或每个配种期结束时要彻底清洗一次。清洗时将罐内存留的液氮全部倒净，取出残留在罐底的细管冻精（颗粒冻精弃之），经过两天左右待容器内的温度上升至室温，以40℃—50℃的温水或中性洗涤剂，用细软的纱布擦洗干净，并敞口凉干内部。有条件的地方可用40℃—50℃热空气吹干封闭，保存备用。
5、药械准备
（1）各改良点或人工授精配种网点，要备齐各种人工授精必用的器械和药品，细管冻精不需要解冻液，但需准备有检查活力的盖玻片与载片、保温箱、卡苏输精器、细管剪刀等常用设施。
（2）器械消毒准备，器械在使用前必须检查有无破损或失灵，输精器及配种所需的外套、细管剪刀等无菌保存所用的毛巾等用洗衣粉温水洗净，然后用清水洗干净，再用蒸溜水冲洗两遍，沥干水分。
（3）药液配制，配制各种药液和解冻液前，应先调整好天平，使药品称量准确，溶液中所用的蒸馏水体积要量度准确，颗粒冻精解冻常用的2.9%柠檬酸钠液一般现用现配，亦可制成安瓿，保存在0℃—5℃的冰箱中，随时取用。
6、细管冻精解冻
（1）首先将38℃—40℃的温水倒入敞口铝式饭盒中，调试好温度，并从液氮中迅速取出细管冻精投入水中快速摆动10—15秒钟，取出后用干净纱布擦去水珠，并放入手掌中快速搓动数下使细管中的精液混匀，为使精液在解冻后可以保存较长时间，以及为了防止输精时室温过低对已经升温的精液产生不良影响，在解冻时不要让精液升温过高。冷冻精液一般要求输精前几分钟，最多不超过15分钟前解冻，并立即使用。必要时也可体温化解，也可35℃水浴30秒解冻，装枪前必须借助手温快速搓动，使温度回升精液复苏再输精，此解冻方法配种技术熟练的人员可尝试，目前不积极提倡。
（2）解冻后的细管冻精用净卫生纸或消毒棉纱擦干，用细管专用剪刀平直横剪封口前端1.2—1.5CM后棉塞端装入输精枪准备输精。
（3）细管冻精也可采用35℃水温30秒钟解冻，此方法可延长精子存活时间，冷配技术熟练人员可尝试。
（4）细管冻精在解冻后应检查精子活力，标准镜检温度37℃—38℃，活力检查需在解冻后3—5分钟精子完全复苏时进行，解冻活力不足0.35不得用以输精，活力评定应取多视野，多液层平均值，解冻精液宜在解冻后立即使用，最多不超过15分钟。
（5）基层各配种站点一定要规范试验室操作方法，配齐简易检测设备，如：保温箱、载片、盖片、细管剪刀等，而且一定要强调检查活力的试验室室温不能低于15℃，保温箱温度不能低于37℃，从而抑制精子活力的复苏。同时，所有检查精子活力的器械设备一定要保持清洁干净，避免人为的因素造成检查精子活力偏低的种种问题出现。
7、输精
（1）母牛发情鉴定：“以直肠检查为主，结合观察询问、检查纪录等综合判断”为准绳的原则进行人工授精。输精适宜时间应在发情末期，即排卵前0—12小时，最好在排卵前6小时，排卵后立即追配一般效果稍差。
（2）输精方法应采用直肠把握子宫颈深部输精法。输精动作要柔和、快捷，做到“轻插、适深、缓注、慢出”。输精剂量必须准确，防止夹吸母牛努责（努责时可将母牛稽甲部捏抓几下）残留精液过多或严重努责时应补输一剂。冬季气温低寒时应防止精液受冷打击，输精枪应用消毒毛巾包裹为佳。
（3）输精人员必须有严格无菌操作观念，输精前结合直检卵泡发育，掏尽粪便。输精前应用千分之一的高锰酸钾水清洗母牛后躯，重点为肛门、会阴、尾根，擦干后用消毒生理盐水棉球擦净外阴部及阴门裂内部，不得有粪便污染。输精器必须在无污染的情况下直接插入阴道，随后再用另一只手插入直肠，把握子宫颈，每输精一次必须更换一支输精器外套。（严格讲外套只需使用一次，但根据我区实际，输精器外套可重复使用数次，但应严格消毒）
（4）输精后，应检查残留量及未滴的精子活力，如剂量不足，活力明显下降，应检查原因，并作补输。
8、记录统计及报表
（1）母牛繁殖记录表，每头母牛登记一张，配种时认真逐项填写，并长期保存，并将冷配产犊公、母性别登记准确，按时统计上报。
（2）评定细管冻精配种效果，主要以第一情期受胎率的高低为标准，一般我们也以平均情期受胎率为标准。MVE液氮罐
