MVE液氮罐储存牛冻精的过程及注意事项

牛的冻精改良技术是目前使用最多、最有效的一种繁殖技术，冻精的正确保存及使用，是保证牛正常受胎的前提之一，在贮存和使用牛冻精时应注意，下面是利用成都金凤液氮罐储存的过程和注意事项

MVE液氮罐储存牛冻精保存过程：

稀释后的精液，采用逐渐降温法。在1—1.5h内，使稀释精液的温度降到4—5℃;然后再在同温的恒温容器内平衡2—4h。平衡、封装后的细管精液上架码放是应注意细管摆放方向，把棉塞封口端靠近操作者，超声波封口端远离操作者，入冷冻仪时亦应如此放置。每架上放上根类似于细管的标记物，一头牛用同一颜色的标记物，便于识别。如同一架上有不同牛的细管精液，要分开码放，两头牛之间要隔开一些距离，以免混淆。

MVE液氮罐储存牛冻精的过程及注意事项

冷冻仪是全自动冷冻研磨机。冷冻仪与低温柜应尽量靠近，开启液氮罐阀门把冷冻仪降温4℃，关闭风扇电源，待风扇完全停止后把已排满待冻细管的架子迅速放入冷冻仪，盖严盖子按电脑预先设定好的最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程。如果冻精细管数量不足时，要填充备用塑料管和细管架以保持最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程，确保冻精质量。

精液冷冻过程中要求温度必须直线下降，不得回升。特别是不得进入精子冷冻-15—-50℃的危险温区，使精细胞内出现冰晶而造成精子死亡。

当细管温度降至-144℃时，打开冷冻仪盖子，将冻制好的细管冻精取出快速以25支包装单位装入特制的塑料拇指管内，迅速浸入液氮中待检。

解冻后在37℃环境下前进运动精子占总精子数的百分率为精子活力。牛冷冻精液的前进运动精子数是评价冻精产品质量的一项重要指标之一。该项指标不仅与受胎率有关，而且关系到冻精产量及优秀种公牛遗传资源的利用率。因此有效精子数要达到国家标准(GB4143-2008)每剂前进运动精子数>1500万个。

解冻温度如同精液冷冻一样，冷冻精液在融解过程中同样也要顺利通过危险区，不会对精子造成冰晶损伤，目前常用解冻温度为38℃左右，解冻10s即可。用纸将解冻后的精液细管擦干，将精液滴在载玻片上进行镜检，经检查合格的入库保存，不合格的废弃。解冻后精液活力应保持在35%以上。

用液氮罐储存牛冻精的注意事项：

1、牛冻精应贮存于液氮罐的液氮中，设专人保管，每周定时加一次液氮，并经常检查液氮罐的状况。

如发现液氮罐外壳结霜，应立即将冻精转移入其它液氮罐内保存，包装好的冻精由一个液氮罐转换到另一个液氮罐时，在液氮罐外停留的时间不得超过3秒，取存冻精后要盖好液氮罐罐塞，在取放盖塞时，要垂直轻拿轻放，不得用力过猛，防止液氮罐罐塞折断或损坏，移动液氮罐时，不得在地上拖行，应提起手柄抬起罐体后再移动。每头公牛的冻精应单独贮存,贮存冻精的容器每年至少清洗一次并更换新鲜液氮。

2、使用冷冻精液时，应注意公牛的品种、名号及批号、作好记录。

MVE液氮罐储存牛冻精的过程及注意事项

由液氮罐提取精液，精液在液氮罐颈部停留不应超过10秒，储精瓶停留部位应在距颈管部8cm以下;颗粒精液在2.9%柠檬酸钠液1～2mL中，水浴加温在(40±0.2)℃解冻;细管精液直接投放在(40±0.2)℃温水中解冻;精液镜检在38～40℃的温度下进行，精子活率不应低于30%，每剂量直线运动精子数颗粒精液在1200万个以上，细管精液在1000万个以上，符合这些标准的精子才可用于输精。

3、牛冷冻精液现在多用0.25毫升微型细管包装。用于人工授精的冷冻精液应来源于系谱齐全、经后裔测定的优秀公牛的精液，而不能因为价廉选用质量差的公牛精液。

冷冻精液解冻后，精子活力不低于0.35，精子复苏率不低于50%，每一剂量直线前进的精子数不低于1000万个，精子畸型率不高于20%，精子顶体完整率不低于40%，无病原微生物。购买的冷冻精液要在专用液氮罐中妥善保存，特别要经常查看液氮面，及时补充液氮。

液氮罐储存牛冻精的过程及注意事项

液氮罐中转移冷冻精液注意事项：

从液氮罐中转移冷冻精液，或者运送冷冻精液时要应小心，减少精液在室温状态下的时间，做好不超过几秒钟，因此，用于运输和储存容器应并排放置，始终保持在液氮罐霜线下面，而定位，识别和抓取吸管时，用一个预冷的止血钳或镊子和转移，将吸管一个接一个地快速送到液氮罐。

小心不要将吸管掉进罐底部，因为它们在这个温度下非常脆，很容易破裂。降低将吸管慢慢地放入罐中然后再加入罐中，重复这个过程，直到所有的吸管都装满了。